یک انسان بالغ به طور متوسط بیش از ۵ لیتر (۶ کوارت) خون در بدن خود دارد. خون برای عملکردهای ضروری زندگی ضروری است، زیرا اکسیژن را منتقل می‌کند و به خلاص شدن از شر سموم یا مواد زائد کمک می‌کند. خون همچنین حاوی سلول‌های ایمنی است که به مبارزه با عفونت‌ها کمک می‌کنند و پلاکت‌ها برای کمک به لخته شدن خون.
اگرچه اغلب برای تزریق خون مورد نیاز است، اما برای بسیاری از روش‌های آزمایشگاهی و تشخیصی مورد نیاز است.
خون را می‌توان برای انجام آزمایش‌های بالینی مختلف، مانند موارد زیر، جمع‌آوری کرد:
شمارش کامل خون (CBC)
پروفایل چربی خون
کراتینین
پروتئین واکنشی C (CRP)
آزمایش‌های ژنتیکی
آزمایش BNP
آزمایش‌های شیمی خون
مطالعات هماتوکریت
آزمایش‌های دیگری نیز ممکن است برای تشخیص شرایط خاص، نظارت بر بیماری‌ها و ارزیابی نحوه عملکرد درمان انجام شود. برای کسب اطلاعات بیشتر در مورد نمونه‌های خون، نحوه جمع‌آوری آنها و تفاوت بین پلاسما و سرم، به خواندن ادامه دهید.
نمونه‌های خون برای آزمایش‌های آزمایشگاهی
آزمایش‌های آزمایشگاهی اغلب با استفاده از نمونه‌های خون انجام می‌شوند. با این حال، همه نمونه‌های خون یکسان نیستند. بسته به هدف یا روش‌های آزمایش بالینی مورد نیاز، ممکن است نمونه‌های خون مختلفی گرفته شود.
نمونه‌های اصلی که می‌توانند جمع‌آوری شوند عبارتند از خون کامل، پلاسما و سرم. این نمونه‌ها قابل تعویض نیستند و برای تهیه نمونه مناسب باید به درستی جمع‌آوری شوند.
نمونه‌های خون در لوله‌های خلاء یا لوله‌هایی که تا حدی تخلیه شده‌اند تا فشار هوای داخلی کمتر از فشار اتمسفر ایجاد شود، جمع‌آوری می‌شوند. این لوله‌ها برای جمع‌آوری حجم دقیق مورد نیاز نمونه طراحی شده‌اند. هرگز نباید هنگام خون‌گیری، خون اضافی را با فشار وارد لوله کرد.
لوله‌های نمونه خون ممکن است درب‌های رنگی متفاوتی داشته باشند تا محتویات آنها را نشان دهند. به عنوان مثال، لوله‌های با درب قرمز حاوی ضد انعقادها، مواد نگهدارنده یا مواد جداکننده نیستند؛ لوله‌های با درب سبز حاوی هپارین و لوله‌های با درب بنفش حاوی EDTA هستند. همچنین لوله‌ها باید پس از جمع‌آوری نمونه، به درستی با تمام اطلاعات لازم بیمار برچسب‌گذاری شوند.
خون کامل
خون کامل از اجزای سلولی خون، از جمله گلبول‌های قرمز، گلبول‌های سفید و پلاکت‌ها تشکیل شده است. این اجزای سلولی در قسمت مایع خون، که به عنوان پلاسما شناخته می‌شود، معلق هستند. پلاسما مایعی به رنگ کاه است که 60٪ خون را تشکیل می‌دهد، در حالی که گلبول‌های سفید، گلبول‌های قرمز و پلاکت‌ها 40٪ خون را تشکیل می‌دهند.
خون کامل معمولاً از یک بیمار اهداکننده گرفته می‌شود و در یک لوله پلاستیکی یا شیشه‌ای حاوی ماده ضد انعقاد استخراج می‌شود. خون کامل برای آزمایش در آزمایشگاه بالینی معمولاً از یک ورید سطحی جمع‌آوری می‌شود.
جمع‌آوری نمونه‌های خون باید به طور مناسب انجام شود تا از همولیز که می‌تواند در اثر تکان دادن نمونه رخ دهد، جلوگیری شود. همولیز با تجزیه و پارگی گلبول‌های قرمز خون مشخص می‌شود که باعث می‌شود هموگلوبین به داخل پلاسما منتقل شود.
نتایج آزمایشگاه ممکن است با نمونه‌هایی که در آنها همولیز رخ داده است، تغییر کند. علل همولیز همچنین شامل جمع‌آوری نامناسب نمونه خون از بیمار، قرار گرفتن در معرض آلاینده‌ها و تغییرات دما و سایر علل است.
پلاسما در مقابل سرم
پلاسما بخش مایع کاهی رنگ خون است که پس از سانتریفیوژ کردن خون با یک ماده ضد انعقاد باقی می‌ماند. این ماده عمدتاً از آب تشکیل شده است. با این حال، حاوی اجزای ضروری دیگری مانند پروتئین‌ها، قندها و مولکول‌های چربی نیز می‌باشد. پروتئین‌های موجود در پلاسما شامل آلبومین، گلوبولین و فیبرینوژن هستند. علاوه بر این، پلاسما حاوی آنزیم‌ها، هورمون‌ها، آنتی‌بادی‌ها و فاکتورهای انعقادی است.
سرم بخش مایع خون است که از لوله نمونه خون که حاوی ماده ضد انعقاد نیست، به دست می‌آید. پس از اینکه نمونه خون لخته شد و سانتریفیوژ شد، مایع حاصل سرم است. اجزای اصلی سرم آلبومین و گلوبولین هستند.
هم پلاسما و هم سرم را می‌توان پس از سانتریفیوژ به دست آورد. تفاوت اصلی بین پلاسما و سرم این است که پلاسما حاوی فیبرینوژن است و سرم ندارد. فیبرینوژن، که به عنوان فاکتور I نیز شناخته می‌شود، فاکتور اصلی انعقاد پروتئین پلاسما است.
به دست آوردن پلاسما در مقابل سرم
پلاسما ممکن است برای یک آزمایش یا فرآیندهای دیگر به دست آید. بهترین روش‌ها برای جمع‌آوری پلاسما شامل تعیین لوله نمونه مناسب برای گرفتن نمونه است.
یک نمونه خون کامل را در لوله حاوی ماده ضد انعقاد صحیح جمع‌آوری کنید و مطمئن شوید که لوله کاملاً پر شده است. سپس، لوله را حدود هشت تا ده بار وارونه کنید، اما لوله‌ها را تکان ندهید. سپس لوله‌های نمونه باید با سرعت ۲۵۰۰ تا ۳۰۰۰ دور در دقیقه به مدت تقریباً ۱۰ دقیقه سانتریفیوژ شوند.
پس از سانتریفیوژ نمونه، پلاسما را در یک لوله انتقال قرار دهید. اکثر نمونه‌ها نیاز دارند که پلاسما ظرف دو ساعت پس از جمع‌آوری از سلول‌ها جدا شود.
برای سرم، لوله نمونه سرم صحیح را برای جمع‌آوری تهیه کنید. برخی از لوله‌ها، به نام لوله‌های جداکننده سرم (SST)، حاوی ژل جداکننده هستند. این ژل سیلیکونی چگالی بین سرم و گلبول‌های قرمز خون دارد. هنگام سانتریفیوژ، ژل سیلیکونی موجود در لوله به عنوان یک لایه نفوذناپذیر عمل می‌کند تا گلبول‌های قرمز خون را در پایین و سرم را در بالا جدا کند.
برای جمع‌آوری سرم، باید از لوله‌ای بدون ماده ضد انعقاد استفاده شود. پس از نمونه‌گیری، لوله باید پنج تا شش بار وارونه شود تا لخته شدن خون تحریک شود. همانند جمع‌آوری پلاسما، برای جلوگیری از همولیز، لوله نباید تکان داده شود.
قبل از سانتریفیوژ، باید به نمونه اجازه داده شود تا به مدت 30 دقیقه لخته شود. پس از آن، نمونه باید به مدت 10 تا 15 دقیقه با سرعت 2500 تا 3000 دور در دقیقه سانتریفیوژ شود. پس از سانتریفیوژ، سرم باید ظرف 45 تا 60 دقیقه به لوله انتقال منتقل شود.
مانند تمام نمونه‌های بیوپسی، ظرف یا لوله باید به طور مناسب برچسب‌گذاری شود.
کاربردهای پلاسما در مقابل سرم
پلاسما و سرم می‌توانند برای چندین هدف استفاده شوند. بسیاری از این اهداف با هم همپوشانی دارند و باید از پلاسما و سرم برای تأیید یا تصدیق نتایج آزمایش استفاده شود.
کاربردهای رایج پلاسما و سرم عبارتند از:
آزمایش‌های تشخیصی
آزمایش‌های آنتی‌بادی
مکمل محیط کشت
آزمایش‌های گروه خونی
اگر فقط یک نمونه پلاسما یا سرم به دست آید، نمی‌توانید نتایج نادرست را تأیید کنید. گرفتن هر دو نمونه پلاسما و سرم می‌تواند انعطاف‌پذیری بیشتری را برای اهداف مختلف ایجاد کند.
داروهای ضد انعقاد برای نمونه‌های خون
لخته شدن ممکن است یک فرآیند ضروری برای جمع‌آوری نمونه‌های خون مناسب باشد. فرآیند لخته شدن خون شامل آبشاری از سرین پروتئازها یا فاکتورهای لخته شدن است. نتیجه این فرآیند تبدیل پروترومبین به ترومبین است که فیبرینوژن را به فیبرین برای لخته شدن خون تبدیل می‌کند. پلاکت‌ها واسطه‌هایی هستند که به تنظیم آبشار لخته شدن خون کمک می‌کنند.
فاکتورهای لخته شدن درگیر در این آبشار شامل فاکتورهای XII، XI، IX و VIII هستند. برای جلوگیری از لخته شدن و گرفتن نمونه‌های پلاسما، باید از داروهای ضد انعقاد استفاده شود. داروهای ضد انعقاد با مختل کردن فعالیت این عوامل و جلوگیری از لخته شدن خون عمل می‌کنند. علاوه بر داروهای ضد انعقاد، ممکن است مواد نگهدارنده به لوله‌های نمونه پلاسما اضافه شود.
برای آزمایش‌های آزمایشگاهی باید از داروهای ضد انعقاد خاصی استفاده شود و قابل تعویض نیستند. این داروهای ضد انعقاد را می‌توان بر اساس ویژگی‌های آنها و نحوه عملکردشان با نمونه مورد آزمایش انتخاب کرد.
EDTA، سیترات و هپارین
لوله‌های جمع‌آوری خون کامل باید حاوی ماده ضد انعقاد مناسب برای جلوگیری از لخته شدن خون باشند. سه ماده ضد انعقاد اصلی برای نمونه‌های خون استفاده می‌شوند: اتیلن دی آمین تترا استیک اسید (EDTA)، سیترات و هپارین. EDTA و سیترات در درجه اول روی یون‌های کلسیم مورد نیاز فاکتورهای انعقادی کار می‌کنند.
EDTA یکی از رایج‌ترین مواد ضد انعقاد مورد استفاده در آزمایشگاه‌های تشخیصی است. این ماده با کیلیت کردن یا حذف کلسیم مورد نیاز برای لخته شدن، از لخته شدن جلوگیری می‌کند. EDTA از اوایل دهه 1950 مورد استفاده قرار گرفته است و مزایای مهمی نسبت به سایر مواد ضد انعقاد دارد. به عنوان مثال، سلول‌های خونی را تغییر شکل نمی‌دهد، که آن را به گزینه خوبی برای بسیاری از آزمایش‌های خون‌شناسی تبدیل می‌کند.
یک نکته در مورد استفاده از EDTA این است که EDTA می‌تواند آنزیم‌های خاصی را که برای فعالیت به یون کلسیم نیاز دارند، مانند آلکالین فسفاتاز، غیرفعال کند. در نظر گرفتن این تداخل برای جلوگیری از تداخل در ایمونواسی مهم است.
سیترات یکی دیگر از داروهای ضد انعقاد رایج است که یون‌های کلسیم را نیز کیلیت می‌کند. این دارو عمدتاً برای آزمایش‌های انعقادی استفاده می‌شود زیرا اثرات آن را می‌توان به راحتی با افزودن یون‌های کلسیم به نمونه معکوس کرد. EDTA و هپارین می‌توانند بر نتایج آزمایش‌های انعقادی، مانند زمان ترومبوپلاستین جزئی فعال (aPTT) و آزمایش‌های زمان پروترومبین (PT) تأثیر بگذارند. بنابراین، رمزگشایی نتایج آزمایش انعقادی با EDTA و هپارین برخلاف سیترات ممکن است دشوار باشد.
هپارین یک داروی ضد انعقاد است که ممکن است برای آزمایش‌های معمول شیمی استفاده شود. این دارو با فعال کردن آنتی‌ترومبین برای مهار ترومبین و انعقاد عمل می‌کند. هپارین در ترکیب با آنتی‌ترومبین III، می‌تواند فاکتور Xa را نیز غیرفعال کند تا انعقاد را مهار کند. ممکن است برای آزمایش‌های کلسترول، CRP و هورمون استفاده شود.
با این حال، هپارین می‌تواند در آزمایش‌های PCR تداخل ایجاد کند (در عوض، EDTA باید برای چنین آزمایش‌هایی استفاده شود). هپارین ممکن است بر مقادیر اندازه‌گیری شده تروپونین I تأثیر بگذارد، زیرا مقادیر تروپونین I در پلاسمای هپارینه معمولاً کمتر از مقادیر موجود در پلاسما یا سرم EDTA است.
بنابراین، کدام ضد انعقاد برای آزمایش‌های تشخیص بالینی بهترین است؟ بستگی دارد. مطمئن شوید که تمام جنبه‌های آزمایش‌های تشخیص بالینی که می‌خواهید انجام دهید را درک می‌کنید تا از نمونه‌های مناسب استفاده کنید.
نکته اصلی درک اینکه چه نوع نمونه‌ای برای سنجش‌های مختلف مناسب است، بسیار مهم است. اگر مطمئن نیستید، باید دستورالعمل‌های سازنده آزمایش را بخوانید. جدول زمانی جمع‌آوری و انتقال نمونه‌های خون را با توجه به محدودیت‌های زمانی در نظر بگیرید.
